产品信息

产品简介：

ZLyticase，中文名细胞壁溶解酶，溶壁酶，能水解聚β(1→3)-葡萄糖（poly-β(1→3)-glucose）比如酵母细胞壁葡聚糖。酵母细胞很难破坏，因为细胞壁可能形成荚膜或耐性孢子。通过使用裂解酶比如溶壁酶（lyticase）、几丁质酶（chitinase）、细胞壁溶解酶（zymolyase）和葡聚糖酶（gluculase）诱导部分原生质球形成，然后接下来酵母细胞被裂解释放DNA。溶壁酶（lyticase）更适合用于消化酵母细胞壁和产生转化用真菌来源的原生质球。

本品以冻干粉形式提供，酶比活力为20,000 units/g，易溶于水，适用于原生质体/原生质球制备、酵母细胞融合、酵母细胞转化和酵母遗传学研究。

产品属性

CAS NO：37340-57-1

同义名： Lyticase;酵母细胞壁溶解酶；酵母细胞壁溶解酵素；溶壁酶；

来源：藤黄节杆菌（Arthrobacter luteus）

外观：冻干粉

比活力：≥200 units/mg solid

单位定义：3ml反应混合液中以酵母细胞悬液为底物，于25℃，pH 7.5条件下，每分钟使得ΔA800发生0.001变化所用的酶量即为一个酶活力单位（unit）。

溶解性：易溶于水

作用谱：报道显示lyticase有效溶解以下前株包括 Ashbva, Candida, Debarvomyces, Eremothecium, Endomvces, Hansenula, Hanseiaspora. Kloeckera. Kluyveromyces, Lipomyces, Metschikowia,Pichia,Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, and Schwanniomycesspecies.

酶活力测定方法

1.实验试剂制备

1.1 超纯水(≥18 MΩxcm resistivity at 25℃)

1.2 磷酸缓冲液(67mM磷酸钾缓冲液，pH 7.5，25℃):用超纯水配制9.1mg/ml磷酸二氢钾溶液，用1M KOH调整pH至7.5(25°C)

1.3 底物(0.4% w/v啤酒酵母(酿酒酵母)悬浮液)

a)使用研钵和研杵研磨适量酵母菌以得到超过800mg的酵母粉。研细的粉未粒径需在25-35网目尺寸。

b)用超纯水加入酵母粉制备4mg/mI醇母溶液。

c)室温条件300rpm搅拌酵母溶液～2h。【注意】:更高速度搅拌会引起酵母细胞的过早裂解;

d)2h后停止搅拌，使得更大沉淀静置下去。小心吸取上方2/3的是浮液到一个新的烧杯内。去除更大沉淀能够在进行分光光度计读数时，降低信噪比。

e)进行实验前需要确定底物浓度。测定酵母混合液和超纯水的A800，吸光度比值在0.6-1.0之间，如有必要，通过改变酵母粉量或超纯水来调整吸光度比值

f)室温条件300rpm混匀底物，能稳定保存高达8h，

1.4 酶溶液

使用前，用冰超纯水配置500 units/ml溶壁酶溶液。【注意):对一些粗制酶(lyticase)可能需要超过15min使其溶解。短时间超声1-15s能够促进酶溶解，但不会影响酶活性。

2. 反应程序

3ml反应体系中，各组分最终浓度是34mM 磷酸钾，～0.12%（w/v）啤酒酵母，25-35 units 溶壁酶

2.1 按下表吸取各组溶液到5ml 离心管内，

2.2 颠倒混合上述各管溶液，并于25℃平衡5分钟。然后加入酶溶液。

2.3 立即颠倒混匀上述各管溶液，记录下～10min后下降后的A₈₀₀。非常重要的是要即刻混匀所有比色皿试剂，并依此测定各管A₈₀₀.

2.4 以2min为检测时间段，记录下每个测试组的最大线性比率△A800/min，每个测试组的最大线性比率需要用空白组来校正。校正后的△A800/min应在0.025-0.035范围内，才能保证后续结果的可靠性。如果不在此范围内，可通过调整适当酶溶液并重复读数。

3. 测定结果

保存与运输方法

-20℃干燥保存，至少1年有效。冰袋运输。

注意事项

1、本品易溶于水，有文献报道按照1900 units/0.2ml PBS配置储存液；也有文献溶于20mM磷酸钠缓冲液，pH 7.0配置20mg/ml储存液，可根据自身需求来配置适宜浓度的储存液，根据单次用量分装冻存。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品：