产品信息：

产品简介：

DiD 染料是亲脂性荧光染料家族成员之一，它可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当 DiD 与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。四种染料呈现不同的荧光颜色：DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI分别用标准FITC和TRITC滤光器检测，可结合使用。DiD可被633 nm 氦-氖（He-Ne）激光激发，具有比DiI更长的激发和发射光波长，特别适合用于标记具本底荧光的细胞和组织。而，DiR在体内活体成像或者示踪中意义非凡，因其所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织，并且在红外光范围内，其本底荧光水平很低。

产品特性

CAS NO.：127274-91-3

化学名：1,1-Dihexadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine   perchlorate

分子式：C61H99ClN2O4

分子量：959.91g/mol

纯度：≥95%

Ex/Em：644/665 nm

外观：紫色或深蓝色固体

溶解性：DMF，DMSO，甲醇

保存条件：-20℃避光保存，一年有效。

使用方法：

1、染色液制备

a.配置DMSO储存液：储存液用DMSO或EtOH配置,浓度1～5 mM。

【注】：1未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，可稳定保存6个月。

必须保证所用溶剂新鲜无水。

b.工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1-5μM的工作液。

【注】：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。

2、 悬浮细胞染色

1) 加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×10⁶/mL。

2) 37 ℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

3) 孵育结束，按1000～1500 rpm离心5 min。

4) 倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5) 重复（3）、（4）步骤两次以上。

3、贴壁细胞的染色

1) 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2) 从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

3) 在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4) 37 ℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

5) 吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10 min，然后吸干培养基。

4、显微镜检测

1) DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。

2) 多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5、流式细胞仪的检测

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。

表1.  DiD，DiO，DiI，DiR，DiS的化学性质

注意事项

荧光染料均存在淬灭问题，染色过程需尽量避光。

为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

DiD 染色固定的细胞或组织样品时，样品宜使用配制在PBS 中的 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高