产品简介

细胞上清/尿液外泌体纯化试剂盒（SEC）能够快速高效地从细胞上清、尿液等样本中提取纯化外泌体，该试剂盒基于尺寸排阻色谱法原理，根据颗粒大小分离纯化外泌体。本试剂盒提取后的外泌体可用于外泌体表征、外泌体功能验证、外泌体药物递送和外泌体标志物发现等研究。

产品组分及储存条件

储存条件：4 ℃     有效期1年

操作流程：

样本预处理

1. 细胞上清

① 收集细胞上清10-50 mL(收集时细胞培养密度不低于1×10⁶cfu/mL);

② 细胞上清离心(3000 g、10 min),保留上清；

③ 上清液使用0.22 μm滤膜过滤；

④ 过滤后用100 kD超滤管进行浓缩，浓缩体积比为1:20,收集浓缩液备用。 

2. 尿液

① 采集中段晨尿约10-50 mL,离心(3000 g、10 min),保留上清；

② 上清液使用0.22 μm滤膜过滤；

③ 过滤后用100 kD超滤管浓缩，浓缩体积比为1:20；收集浓缩液备用。

外泌体分离

1. 试剂准备

保存液(5×)和清洗液(5×)均需要用去离子水稀释到1×，所用试剂需用0.22 μm滤膜过滤后再使用；

自备1×PBS，使用0.22 μm滤膜过滤后再使用或者采购已过膜的PBS（使用前需平衡到室温）。

2. 柱平衡

① 从冰箱取出SEC纯化柱，将其垂直固定（需自备固定装置）；

② 置于室温下放置30分钟；

③ SEC纯化柱下方放置一个空烧杯；

④ 打开顶部柱塞和底盖，将管中保存液排空至底部出口无液体流出，向柱中加入15mL 1×PBS，可分次加，让液体全部流出，再上样。

3. 样品上样

① 取8个EP管，依次标记为1，2，3，4，5，6，7，8；

② 将1 mL样品从SEC纯化柱顶部沿壁加入，样品完全进入填料并且底部出口无液体流出后，加入0.5 mL 1×PBS，使用EP管1收集流出液，收集体积为0.5 mL；

③ 待上一个0.5 mL 1×PBS全部进入排阻柱内后，再添加0.5 mL的1×PBS，使用EP管2收集流出液，收集体积为0.5 mL；

注意：使用时应尽量保证柱内有液体，以确保填料能够被充分润湿。

④ 重复③操作6次，总共收集8管洗脱液。

注意：1. 样品最小体积不应小于1 mL；样品不足1 mL时，用1×PBS补到1 mL，混匀后再上样。

4. 外泌体收集

① 若想获得高回收率外泌体：保留3，4，5，6，7的馏分，共计2.5 mL；若不区分馏分，在第2个0.5 mL 1×PBS全部进入排阻柱内后，直接加入2.5 ml 1×PBS，洗脱至一个收集管中。

② 若想获得高纯度外泌体：将第4，5，6的馏分合并，共计1.5 mL。

注意： 如需浓缩外泌体洗脱液，可使用100 kDa超滤管，4000 g离心浓缩到目的体积即可。

5. SEC纯化柱的清洗与储存

收集结束后，加10 mL清洗液，接着用1×PBS冲洗15 mL，再用1×保存液冲洗10 mL。将底盖关闭，用1×保存液填满SEC纯化柱，用柱塞封闭顶部端口并检查无液体流出后，4 ℃保存。

注意：1. 该SEC纯化柱可重复使用10次。

2. 使用结束后需要用封口膜将柱上端封死，避免保存液挥发。

注意事项

本品仅限于科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。