金黄色链霉菌 Tü117 的准确灵敏检测对于高血压分类和早期预警至关重要。为实现这一目标，开发了一种双重组酶聚合酶扩增与 crRNA 阵列介导的 CRISPR/Cas12a 检测方法（DR-CAMCas），能够实现多信号输出，以精确识别和检测金黄色链霉菌 Tü117。通过一步双重 RPA 同时扩增金黄色链霉菌 Tü117 的 16S rDNA 和 LipReg4 基因，激活 crRNA 阵列介导的 CRISPR/Cas12a 系统切割外源 FQ 报告分子，释放荧光信号。DR-CAMCas 具有高扩增效率、通过 crRNA 阵列信号叠加实现多位点识别以及 CRISPR/Cas12a 的可编程性，实现了超灵敏检测，线性范围为 10 至 108 cfu/mL，检测限约为 3 cfu/mL。DR-CAMCas 成功地在高盐饮食诱导的高血压小鼠和高血压患者的粪便样本中检测到金黄色链霉菌 Tü117，与 qPCR 结果相符，显示出高可靠性和实用性。此外，DR-CAMCas 中的目标诱导切割 DNA 连接子使 AuNPs-DNA 探针分散，实现比色检测。整合到侧流传感器上，DR-CAMCas 可通过简单的可视条带分析进行即时检测。其三重信号输出满足不同的检测需求，为诊断盐敏感性高血压提供了一种有前途的工具。
（A）crRNA 阵列的结构、自由能和琼脂糖凝胶。（B）crRNA 阵列的识别位点、双重 RPA 过程以及 crRNA 阵列介导的 CRISPR/Cas12a 检测信号的叠加效应。（C）crRNA 阵列的琼脂糖凝胶。（D）双重 RPA 和单独 RPA 产物的琼脂糖凝胶。（E、F）使用不同 crRNA 检测 16S rDNA 和 LipReg4 基因的荧光光谱（金色链霉菌 Tü117：107 cfu/mL）。
单链向导 RNA（single crRNA）介导的 CRISPR/Cas12a 与双重重组酶聚合酶扩增（dual RPA）耦合对 16S rDNA 和 LipReg4 基因的荧光响应（A、B）以及随时间变化在不同单链向导 RNA 存在下的热图。（E、F）使用单链向导 RNA 介导的 CRISPR/Cas12a 与双重 RPA 耦合检测 16S rDNA 和 LipReg4 基因的检测性能。
DR-CAMCas 方法对金色链霉菌 Tü117 检测的检测性能。（A、B）DR-CAMCas 检测对 16S rDNA 和 LipReg4 基因的荧光响应随时间变化。（C、D）在不同 crRNA 存在下，由 16S rDNA 和 LipReg4 基因诱导的 DR-CAMCas 终点荧光热图。（E）使用 DR-CAMCas 对金色链霉菌 Tü117 的识别过程。DR-CAMCas（crRNA1 + 2 + 3）对金色链霉菌 Tü117 的 16S rDNA 和 LipReg4 基因的荧光响应（H、K）和选择性（H、K）。（G、J）使用不同 crRNA 组合的 DR-CAMCas 对 16S rDNA 和 LipReg4 基因的检测性能。
（A）高血压患者和高盐饮食诱导的高血压模型小鼠的粪便样本。（B）金色链霉菌 Tü117 的革兰氏染色。比例尺：20μm。高盐饮食小鼠对体重（C）、收缩压（D）、舒张压（E）和平均动脉压（F）的影响（n = 12）。（G - J）使用 DR-CAMCas 和 qPCR 检测高血压小鼠粪便样本中的 16S rDNA 和 LipReg4 基因（对照组：6 只；血管紧张素 II 组：6 只；高脂饮食组：6 只；高盐组：24 只）。（L - O）使用 DR-CAMCas 和 qPCR 检测临床样本（正常人：30 人；高血压患者：30 人）粪便样本中的 16S rDNA 和 LipReg4 基因。（K，P）评估 DR-CAMCas 和 qPCR 在临床样本检测中的一致性。*p < 0.05 与对照组相比，**p < 0.01 与对照组相比，****p < 0.0001 与对照组相比。
比色探针的表征。金纳米粒子的 TEM 图像（A、B）、映射图像（C）和 EDS 分析（D）。（B）系列金纳米粒子稀释液的紫外-可见吸收光谱。（F）金纳米粒子、金纳米粒子-DNA 以及与 DNA 连接子交联的金纳米粒子-DNA 对的紫外-可见吸收光谱。（G）用 Arm-DNA 修饰前后的金纳米粒子的 Zeta 电位。（H）比色检测可行性评估。使用 DR-CAMCas 测定法与目标 DNA 反应后比色探针的 TEM 图像（I）和元素分析（J-M）。使用 DR-CAMCas 测定法在没有目标 DNA 的情况下比色探针的 TEM 图像（N）和元素分析（O-R）。
金黄色链霉菌 Tü117 的比色法和即时检测。（A）金黄色链霉菌 Tü117 的肉眼检测过程。照片（B、C）金黄色链霉菌 Tü117 浓度增加时 16S rDNA 和 LipReg4 基因肉眼检测的紫外-可见吸收光谱（D、H）及相应的线性拟合曲线（E、I）。（F、J）比色 DR-CAMCas 方法对金黄色链霉菌 Tü117 检测的选择性。（G、K）比色 DR-CAMCas 检测法在高血压小鼠粪便样本检测中的实际应用。（L）DR-CAMCas 在侧流生物传感器（LFB）中的整合。基于 DR-CAMCas 的 LFB 检测法对金黄色链霉菌 Tü117 的 16S rDNA 和 LipReg4 基因检测的可行性（M）、检测性能（N、P）和选择性分析（O、Q）
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货号 |
产品 |
规格 |
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B8201C1 |
DNA恒温快速扩增试剂盒（DNA基础型） |
48T |
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B8202C3 |
DNA恒温快速扩增试剂盒（DNA荧光型） |
48T |
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B8203C5 |
DNA恒温快速扩增试剂盒（DNA试纸条型） |
48T |
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B8204C7 |
RNA恒温快速扩增试剂盒（RNA基础型） |
48T |
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B8205C9 |
RNA恒温快速扩增试剂盒（RNA荧光型） |
48T |
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B8206C0 |
RNA恒温快速扩增试剂盒（RNA试纸条型） |
48T |
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JY0209 |
双靶标HybriDetect侧向层析试纸条（彩虹型） |
50T |
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JY0201 |
单靶标HybriDetect侧向层析试纸条（彩虹型） |
50T |
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JY0307 |
CRISPR单酶切及扩增产物检测试纸条 |
50T |
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JY0301 |
CRISPR Cas12/13 HybriDetect试纸条 |
50T |
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JY0308 |
CRISPR双酶切检测试纸条（变色龙） |
50T
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Cas酶系列
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货号 |
包装规格 |
中文名称 |
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32108-01 |
100 pmoL |
LbCas12a (Cpf1) |
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32108-03 |
1,000 pmoL |
LbCas12a (Cpf1) |
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32117-01 |
100 pmoL |
LwaCas13a (C2c2) |
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32117-03 |
1,000 pmoL |
LwaCas13a (C2c2) |
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32118-01 |
100 pmoL |
AapCas12b (C2c1) |
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32118-03 |
1,000 pmoL |
AapCas12b (C2c1) |
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32119-01 |
100 pmoL |
Un1Cas12f1 (Cas14a1) |
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32119-03 |
1,000 pmoL |
Un1Cas12f1 (Cas14a1) |
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32104-01 |
100 pmoL |
AsCas12a (Cpf1) |
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32104-03 |
1,000 pmoL |
AsCas12a (Cpf1) |
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32116-01 |
100 pmoL |
AacCas12b (C2c1) |
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32116-03 |
1,000 pmoL |
AacCas12b (C2c1) |
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32106-01 |
100 pmoL |
FnCas12a (Cpf1) |
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32106-03 |
1,000 pmoL |
FnCas12a (Cpf1) |
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32110-01 |
100 pmoL |
Lb5Cas12a (Cpf1) |
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1,000 pmoL |
Lb5Cas12a (Cpf1) |
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32101-01 |
100 pmoL |
SpCas9 |
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32101-03 |
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SpCas9 |
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32102-01 |
100 pmoL |
Sp-dCas9 |
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32102-03 |
1,000 pmoL |
Sp-dCas9 |
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32120-01 |
100 pmoL |
Sp-nCas9（H840A） |
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32120-03 |
1,000 pmoL |
Sp-nCas9（H840A） |