产品简介

麦胚凝集素(WGA)是一种与N-乙酰-D-氨基葡萄糖和唾液酸结合的凝集素。它是生物应用中研究最多和最有用的凝集素。由于WGA与糖缀合物结合，其衍生物和缀合物被广泛用于标记细胞膜和纤维化疤痕组织，以进行荧光成像和分析。WGA的碳水化合物结合特异性针对β-1，4-GlcNAc连接的残基序列，即壳糊精。每个单体包含两个相同的、不相互作用的结合位点，它们与3或4个β-1，4-GlcNAc单元互补。在检测的单糖中，只有GlcNAc与WGA结合。ManNAc不结合，而GalNAc仅弱结合。WGA的iFluor 647缀合物显示出iFluor 647染料明亮的红色荧光。iFluor 647 WGA缀合物与AF647 WGA缀合物一样结合唾液酸和N-乙酰氨基葡萄糖残基。

产品性质

Ex (nm)：656

Em (nm)：670

溶剂：Water

适用仪器

荧光显微镜  

Ex:                        Cy5 滤波片组

Em：                  Cy5 滤波片组

推荐孔板:                黑色透明底板

储备溶液配制

iFluor 647 小麦胚芽凝集素 (WGA) 缀合物储备液 (200X)：将 500 µL ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的储备溶液。

注意：重新配制的缀合物溶液可在 2-8 °C 下短期储存，或在 -20 °C 下长期储存。

工作溶液配制

iFluor 647小麦胚芽凝集素 (WGA) 缀合物​​工作溶液 (1X)：将 5 μL 200X WGA 储备溶液添加到 1 mL HHBS 缓冲液中。

注意：不同细胞系的优化染色浓度可能不同。 活细胞的推荐起始浓度为 5-10 µg/mL。

操作方案

活细胞染色

1. 用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。

2. 添加 100 µL iFluor 647-WGA 工作溶液。

3. 将细胞与 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分钟。

4. 用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。

5. 使用 Cy5 滤波片组在荧光显微镜上成像细胞。

固定细胞染色

1. 用含4%甲醛的PBS溶液固定细胞。

注意：对于固定细胞膜染色，建议在没有透化步骤的情况下进行染色。固定后透化步骤会导致细胞内区室染色，如高尔基体和内质网 (ER) 结构染色。

2. 添加 100 µL iFluor 647-WGA 工作溶液。

3. 在室温下，用 WGA 工作溶液孵育细胞 10-30 分钟。

4. 用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。

5. 使用 Cy5 滤波片组在荧光显微镜上成像细胞。

运输与保存方法

冰袋运输。在零下15度以下保存, 避免光照。

注意事项 ：

1、该产品不适用于革兰氏阴性细菌。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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